Электронный научный журнал

Введение. В условиях постарения населения сердечно-сосудистые заболевания являются ведущей причиной смертности населения, составляя 57% от общей смертности. Хроническая венозная недостаточность нижних конечностей (ХВН) является самой распространенной патологией сосудистой системы. В возрастной группе 55-64 года это заболевание находят у 56% человек, у 75% пациентов заболевание сопровождается отеком, у 20% пациентов в возрасте старше 70 лет отмечаются трофические нарушения [Onida S. et al., 2015]. Серьезными проблемами гериатрической практики является полиморбидность. Для пациентов пожилого возраста с ХВН характерно наличие сопутствующего атеросклеротического поражения сосудов, ишемической болезни сердца, артериальной гипертонии, сахарного диабета, ассоциированного с болезнями глаз и почек [Прощаев К.И., Ильницкий А.Н., 2008].

Цель исследования. Исследовать состояние нейроиммуноэндокринной системы при ХВН и сочетанной патологии ХВН с СД (сахарным диабетом) 2 типа.  

Материалы и методы.

В исследование было включено 190 человек пожилого и среднего возраста. Все люди, включенные в исследование, были разделены на несколько групп:

1. Практически здоровые люди (n=64):

1.1. практические здоровые люди среднего возраста (n=31, возраст от 40 до 49 лет, средний возраст 45,2+2,3 года, мужчин – 15 чел., женщин  - 16 чел.); 1.2. практические здоровые люди пожилого возраста (n=33, возраст от 60 до 69 лет, средний возраст 64,7+2,2 года, мужчин – 15 чел., женщин  - 18 чел.).

2. Пациенты, страдающие ХВН (n=62):

2.1. пациенты среднего возраста, страдающие ХВН: (n=30, возраст от 40 до 49 лет, средний возраст 44,8+2,8 года, мужчин – 13 чел., женщин  - 17 чел.); 2.2. пациенты пожилого возраста, страдающие ХВН (n=32, возраст от 60 до 69 лет, средний возраст 64,4+2,4 года, мужчин – 15 чел., женщин  - 17 чел.).

Все пациенты в этой группе страдали ХВН класса С2 - С3   (классификация CEAP, 1994).

3. Пациенты, страдающие ХВН и сахарным диабетом (СД) 2 типа (n=64):

3.1. пациенты среднего возраста, страдающие ХВН  и СД 2 типа (n=32) (возраст  от 40 до 49 лет, средний возраст 45,2+2,1 года, мужчин – 15 чел., женщин  - 17 чел.); 3.2. пациенты среднего возраста, страдающие ХВН и СД 2 типа (n=32, возраст от 60 до 69 лет, средний возраст 65,2+2,2 года, мужчин – 14 чел., женщин  - 18 чел.).

Все пациенты в этой группе страдали ХВН класса С2 - С3   (классификация CEAP, 1994) и СД II типа легкой и средней степени тяжести. ХВН класса С2-С3 диагностировали с использованием клинического и инструментального методов обследования.

Клиническое обследование включало выявление жалоб, анамнез, осмотр определение индекса массы тела, общий анализ крови, общий анализ мочи. В качестве инструментального метода использовали ультразвуковую диагностику в В-режиме, допплеровское исследование. У каждого пациента было получено согласие  на проведение данных исследований. Сахарный диабет 2 типа диагностировали по рекомендациями ВОЗ «Definition and diagnosis of diabetes mellitus and intermediate hyperglycemia» (2006).                                                                        

Исследование выполнялось по двум направлениям:

Первое направление. Исследование цитокинового профиля при ХВН, сочетании ХВН и  СД 2 типа у пациентов разного возраста: изучение содержания в сыворотке крови  фактора некроза опухоли альфа (TNF-α), интерлейкинов (IL) IL-1β, IL-4, IL-6, IL-8, IL-10.

Второе направление. Исследование  в сыворотке крови уровня иммунореактивного инсулина (ИРИ), глюкозы, МДА.

Определение в сыворотке крови уровня цитокинов

Для определения роли нейроиммуноэндокринной системы в развитии ХВН и эффективности проводимой комплексной терапии  у больных ХВН и практически здоровых людей из контрольной группы  в утреннее время натощак производили забор крови пункционным методом из локтевой вены с помощью широкой иглы в пластиковые пробирки, из которой готовили сыворотку. Полученный субстрат помещали в пробирки типа Eppendorf и хранили при температуре -20 ^оС до момента проведения анализа. Уровень цитокинов (TNF-α, IL-1β, IL-4, IL-6, IL-8, IL-10) определяли методом твердофазного иммуноферментного анализа (ИФА) с использованием реактивов ЗАО «Вектор-Бест», г. Новосибирск на планшетном спектрофотометре  Thermo Scientific Multiskan Go.

Биохимические исследования

Содержание глюкозы и ИРИ определяли в сыворотке крови, взятой из локтевой вены в утреннее время натощак  (производили забор крови пункционным методом с помощью широкой иглы в пластиковые пробирки, из которой готовили сыворотку). Концентрацию глюкозы в сыворотке крови определяли ферментативным методом на основе глюкозооксидазной реакции с использованием наборов реактивов «Fluitest® GLU» фирмы BioCon (Германия). Содержание ИРИ в сыворотке крови определяли радиоиммунным методом с использованием набора реактивов «рио-ИНС-ПГ-1251» «ХОП ИБОХ НАНБ» (г. Минск, Беларусь) на сцинтилляционном счетчике «WALLAC 1470 WIZARD TM FACIT E 560» (Финляндия). Уровень ПОЛ оценивали по содержанию в свежеприготовленной сыворотке крови  МДА. В основе метода лежит реакция между МДА и тиобарбитуровой кислотой, которая при высокой температуре и кислом значении pH протекает с образованием окрашенного триметинового комплекса, содержащего одну молекулу МДА и две молекулы тиобарбитуровой кислоты. Максимум поглощения комплекса приходится на 532 нм. По оптической плотности образующихся продуктов судили о содержании МДА.

Статистическая обработка результатов

Статистическую обработка материала выполняли на персональном компьютере в статистических программных пакетах  MicrosoftExcel, Statistica 6.0. При статистическом анализе материала выполняли расчет интенсивных и экстенсивных показателей средних величин, определяли достоверность различий средних и относительных величин по t-критерию Стьюдента. Достоверными считали различия при р<0,05.

Результаты и обсуждения.

По данным исследования было установлено, что уровень TNF-α в сыворотке крови существенно зависит от наличия ХВН и сопутствующего СД2. Достоверно показано (p<0,05), что увеличение этого показателя при ХВН по сравнению с группой контроля не превышает исходный уровень более чем в 1,5 раза и не зависит от возрастной группы пациента. Уровень TNF-α в сыворотке крови у пожилых людей, страдающих ХВН, составил 109,0±4,5 пг/мл против 105,6±4,4 пг/мл у людей среднего возраста (p>0,05), при сочетании ХВН СД 2 типа – соответственно 154,0±5,9  пг/мл и 135,0±5,5 пг/мл (p<0,05) соответственно (рис. 1).

Рисунок 1. Зависимость уровня TNF-α в сыворотке крови больных ХВН от возраста и сопутствующего СД 2 типа.

Достоверно установлено, что концентрация IL-1β  в сыворотке крови примерно в 1,5 раза превосходит контрольный уровень у здоровых людей пожилого возраста и примерна на треть выше у людей среднего возраста по сравнению с контролем (p<0,05). Уровень IL-1β  в сыворотке крови при увеличении полиморбидности за счет присоединения СД 2 типа достоверно (p<0,05) увеличивается по сравнению с пациентами, страдающими только ХВН. Существенно, что как у здоровых людей, так и у пациентов с ХВН и ХВН + СД2 типа уровень этой сигнальной молекулы практически не отличается у людей среднего и пожилого возраста при сравнении показателей в соответствующих группах (p>0,05). Так, уровень IL-1β в сыворотке крови у пожилых людей, страдающих ХВН, составил 290,4±29,4 пг/мл против 189,2±22,3 пг/мл у относительно здоровых людей (p<0,05), при переходе к ХВН + СД 2 типа – 394,8±36,6 пг/мл (p<0,05); у людей среднего возраста -  240,5±25,5 пг/мл и 185,0±22,0 пг/мл и 350,0±32,2  пг/мл соответственно (p<0,05). Отсутствие достоверных различий в концентрации IL-1β в сыворотке крови   у людей среднего и пожилого возраста не позволяет рассматривать этот показатель как фактор различий в активации провоспалительной системы в ходе старения организма. В тоже время, можно полагать, что концентрация IL-1β,  как одного из ключевых агентов иммунного воспаления, при ХВН и сочетании ХВН с СД 2 типа может служить дополнительным индикатором хронического воспалительного процесса.

При изучении цитокинового профиля сыворотки крови людей пожилого возраста, которые страдают ХВН, установлено что уровень IL-4 достоверно  отличается от контрольных значений в группе сравнения. Содержание IL-4 в сыворотке крови у здоровых людей среднего возраста составило 7,8±1,3 пг/мл. Нарастание полиморбидности приводит к достоверному (p<0,05) нарастанию степени интерлейкинемии по показателю IL-4. Так, у больных среднего возраста с ХВН уровень IL-4 в сыворотке крови составил  14,3±1,7 пг/мл, у больных с ХВН и СД 2 типа уровень этой молекулы в сыворотке крови составил 20,6±1,9 пг/мл. 

Дальнейшее нарастание полиморбидности приводило к достоверному (p<0,05) нарастанию степени интерлейкинемии по показателю IL-4. У больных пожилого возраста с ХВН и СД 2 типа уровень этой молекулы в сыворотке крови составил 15,5±1,6 пг/мл. Важно отметить, что достоверно более низкий уровень (p<0,05)  IL-4 в сыворотке крови  у людей пожилого возраста в сравнении с людьми среднего возраста наблюдался во всех изученных случаях (как при монопатологии ХВН, так и при полиморбидной патологии).

При исследование цитокинового профиля сыворотки крови людей пожилого возраста, которые страдают ХВН, установлено что уровень IL-6 существенно зависит от стадии заболевания.       Концентрация IL-6 в сыворотке крови у здоровых людей среднего возраста составила       6,7±1,2 пг/мл. При изолированном течении ХВН не происходило достоверного увеличения содержания данной сигнальной молекулы в сыворотке крови, показатель составил 7,3±1,3 пг/мл (р>0,05 по сравнению со здоровыми людьми среднего возраста). Дальнейшее же нарастание полиморбидности приводило к достоверному (p<0,05) нарастанию степени интерлейкинемии по показателю IL-6. Так, у больных среднего возраста с ХВН и СД 2 типа уровень этой молекулы в сыворотке крови составил 12,5±1,8 пг/мл. Содержание IL-6 в сыворотке крови у здоровых людей пожилого возраста составило 6,8±1,2 пг/мл. При изолированном течении ХВН имело место достоверное увеличение содержания данной сигнальной молекулы в сыворотке крови до 9,8±1,4 пг/мл (р<0,05 по сравнению со здоровыми пожилыми людьми). Дальнейшее нарастание полиморбидности приводило к достоверному (p<0,05) нарастанию степени интерлейкинемии по показателю IL-6. У больных пожилого возраста с ХВН и ИБС уровень этой молекулы в сыворотке крови составил 17,3±2,0 пг/мл. При этом достоверные отличия в сравнении со средним возрастом наблюдались только при ХВН и СД 2 типа (p<0,05). В случае монопатологии ХВН отличия были недостоверными (p>0,05). Характерно, что значимые различия в уровне IL-6  проявляются только при сочетании ХВН+СД 2 типа. Этот факт прямо указывает на взаимосвязь между возрастом (средним или пожилым) и характером влияния полиморбидности на уровень цитокина. Такая динамика изменения концентрации IL-6 в сыворотке, по-видимому, отражает дуализм регулирующего влияния этого медиатора на иммунное воспаление при ХВН: с одной стороны – подавление, с другой – активация. Учитывая существенные значимые (p<0,05) различия в уровне  IL-6 в сыворотке крови, цитокинемию по  IL-6 возможно использовать как дополнительный маркер иммунного воспаления при ХВН.

При исследование цитокинового профиля сыворотки крови людей пожилого возраста, которые страдают ХВН, установлено что уровень IL-8 существенно зависит от наличия сопуствующего СД 2 типа. Содержание IL-8 в сыворотке крови у здоровых людей пожилого возраста составило 5,1±0,6 пг/мл. Этот показатель достоверно (p<0,05) выше, чем у людей среднего возраста.  При изолированном течении ХВН имело место достоверное увеличение содержания данной сигнальной молекулы в сыворотке крови до 9,6±1,3 пг/мл (р<0,05 по сравнению со здоровыми пожилыми людьми). Дальнейшее нарастание полиморбидности приводило к достоверному (p<0,05) нарастанию степени интерлейкинемии по показателю IL-8. У больных пожилого возраста с ХВН и СД 2 типа уровень этой молекулы в сыворотке крови составил 16,7±1,7 пг/мл. Важно отметить, что достоверно более высокий уровень (p<0,05)  IL-8 в сыворотке крови  у людей пожилого возраста в сравнении с людьми среднего возраста наблюдался во всех изученных случаях (как при монопатологии ХВН, так и при полиморбидной патологии). Учитывая существенные значимые (p<0,05) различия в уровне  IL-8 в сыворотке крови, цитокинемию по  IL-8 возможно использовать как дополнительный маркер ХВН и ХВН в сочетании с СД 2 типа (табл. 1).

Таблица 1

Зависимость уровня IL-8  в сыворотке крови больных ХВН пожилого и среднего возраста от степени полиморбидности

* p<0,05 по сравнению со здоровыми людьми;

^#p>0,05 по сравнению с пациентами с ХВН.

При исследование цитокинового профиля сыворотки крови людей пожилого и среднего возраста, которые страдают ХВН, установлено что уровень IL-10 существенно зависит от наличия сопуствующего СД 2 типа. Так, в сыворотке крови у здоровых людей среднего возраста он составил 2,1±0,4 пг/мл. Нарастание полиморбидности приводит к достоверному (p<0,05) нарастанию степени интерлейкинемии по показателю IL-10. Так, у больных среднего возраста с ХВН уровень IL-10 в сыворотке крови составил  6,3±1,1 пг/мл, у больных с ХВН и СД 2 типа уровень этой молекулы в сыворотке крови составил 9,7±1,4 пг/мл.

Содержание IL-10 в сыворотке крови у здоровых людей пожилого возраста составило 1,4±0,2 пг/мл. Этот показатель достоверно (p<0,05) ниже, чем у людей среднего возраста.  При изолированном течении ХВН имело место достоверное увеличение содержания данной сигнальной молекулы в сыворотке крови до 3,4±1,0 пг/мл (р<0,05 по сравнению со здоровыми пожилыми людьми). Дальнейшее нарастание полиморбидности приводило к достоверному (p<0,05) нарастанию степени интерлейкинемии по показателю IL-10. У больных пожилого возраста с ХВН и СД 2 типа уровень этой молекулы в сыворотке крови составил 7,0±1,2 пг/мл.

Существенно, что достоверно более низкий уровень (p<0,05)  IL-10 в сыворотке крови  у людей пожилого возраста по сравнению с людьми среднего возраста наблюдался во всех изученных случаях (как при монопатологии ХВН, так и при полиморбидной патологии). Очевидно, что экспрессия IL-10 при ХВН недостаточна и не позволяет в достаточной мере ингибировать сверхпродукцию TNF-α и, таким образом, вызвать торможение процессов воспаления эндотелия сосудов нижних конечностей.

Дальнейшее нарастание полиморбидности приводило к достоверному (p<0,05) нарастанию степени интерлейкинемии по показателю IL-10. У больных пожилого возраста с ХВН и СД 2 типа уровень этой молекулы в сыворотке крови составил 9,6±1,3 пг/мл.   Важно отметить, что достоверно более низкий уровень (p<0,05)  IL-10 в сыворотке крови  у людей пожилого возраста по сравнению с людьми среднего возраста наблюдался во всех изученных случаях (как при монопатологии ХВН, так и при полиморбидной патологии).

Исследование уровня глюкозы в сыворотке крови людей пожилого и среднего возраста с диагнозом ХВН показало отсутствие существенных различий, однако присоединение СД 2 типа приводит к достоверному увеличению этого показателя (табл. 2).

Таблица 2

Зависимость уровня глюкозы  в сыворотке крови больных ХВН пожилого и среднего возраста от степени полиморбидности

* p>0,05 по сравнению со здоровыми людьми;

^#p<0,05 по сравнению с пациентами с ХВН;

^O p>0,05 по сравнению с пациентами среднего возраста.

Установлено, что уровень МДА в сыворотке крови людей пожилого и среднего возраста с диагнозом ХВН существенно не отличается, однако присоединение СД 2 типа приводит к достоверному увеличению этого показателя (табл. 3).

Таблица 3

Зависимость уровня МДА  в сыворотке крови больных ХВН пожилого и среднего возраста от степени полиморбидности

* p>0,05 по сравнению со здоровыми людьми;

^#p<0,05 по сравнению с пациентами с ХВН;

^O p>0,05 по сравнению с пациентами среднего возраста.

Таким образом, исследование показало, что при разработке программ реабилитации больных пожилого возраста с диагнозом ХВН необходимо учитывать вероятную полиморбидность патологии. При практическом прогнозировании и оценке  эффективности лечения ХВН и ХВН в сочетании с СД 2 типа у больных пожилого возраста целесообразно использовать дополнительные маркеры – концентрацию цитокинов в сыворотке крови. Наибольший эффект может быть достигнут при использовании нескольких показателей. Полученные экспериментальные данные могут быть экстраполированы в практическое здравоохранение, а также в экспериментальную медицину с целью дальнейшего изучения патогенеза ХВН.

Список использованных источников и литературы:

1. Патрухин А.П. Плейотропные эффекты комплексной терапии в коррекции полиморбидных состояний у людей пожилого возраста / А.П. Патрухин, И.А. Павлова  и др. // Актуальные вопросы геронтологии и гериатрии: научн. конф. молодых ученых с междунар. участием, посв. памяти акад. В.В. Фролькиса, 25 января 2013 г., г. Киев: тез. докл. / ГУ «Институт геронтологии имени Д.Ф. Чеботарева НАМН Украины. - К., 2013.

2. Прощаев К.И. Молекулярная диагностика тяжести,  прогноза течения и эффективности фармакотерапии при полиморбидной соматической патологии в пожилом возрасте / К.И. Прощаев, Т.В. Кветная, А.Н. Ильницкий и др. // Фармакология, фармацевтическая технология и фармакотерапия в обеспечении активного долголетия: I Международ. науч.-практ. конф., 4-5 апреля 2013 г., г. Киев: тез. докл. / Геронтологический журнал им. В.Ф. Купревича. - 2013. - Т. 4, № 1-2,  С. 37-38.

3. Прощаев К.И. Статус противовоспалительной системы организма при биофлавоноидной терапии хронической венозной недостаточности у людей пожилого возраста / К.И. Прощаев, В.И. Бессарабов, Н.П. Здерко, и др. // Технологические и биофармацевтические аспекты создания лекарственных препаратов разной направленности действия: материалы II Междунар. науч.-пр. интернет-конф. , 12-13 ноября 2015 г., г. Харьков. – Х.: Изд-во НФаУ, 2015. – С. 368-369.

4. Шамараева И.В. Компьютерный прогноз возможных плейотропных эффектов препарата мофф диосмин + гесперидин методами виртуальной хемогеномики / И.В. Шамараева, И.П. Пономарева,  К.И. Прощаев, В.И. Бессарабов // Современные проблемы науки и образования. – 2014. – № 4.